Evaluation de l’intérêt thérapeutique d’un Ac. Monoclonal développé pour une application diagnostique : Cas du clone 83D4 anti marqueur Tn

Le contexte

Les biothérapies, et plus particulièrement les anticorps monoclonaux thérapeutiques, occupent une place de plus en plus importante dans le traitement des cancers. Depuis maintenant plus de 10 ans, quelques anticorps monoclonaux, seuls ou associés à d'autres thérapies (chimiothérapie, radiothérapie), ont montré une activité anti-cancer, et leur capacité à augmenter la durée de vie de patients présentant des tumeurs hématologiques ou des tumeurs solides. Le Rituximab dans l'amélioration de la survie des patients atteints de lymphomes, le trastuzumab dans le traitement des carcinomes mammaires HER-2neu positifs, et le bévacizumab dans le traitement du cancer colorectal, du cancer bronchique, de l'hypernéphrome et du carcinome du sein, en sont quelques exemples.

La problématique du Client

Dans les années 90, la Division d'Immuno-Cytologie Appliquée (DICA) de l'Unité CNRS dirigée par le Professeur Daniel Thomas à l'Université de Technologie de Compiègne a développé une lignée productrice d'anticorps monoclonaux dirigés contre l'un des antigènes associés aux tumeurs (Tn) de certains cancers (sein, colon.), le clone 83D4. A l'origine, ces anticorps ont été utilisés pour le diagnostic du cancer du sein en sérologie et en anatomopathologie .

Le clone 83D4 n'ayant pas été sécurisé depuis les années 90, l’équipe du Pr Thomas ne sait pas si les cellules sont encore viables et si elles ont conservé leur capacité à sécréter les anticorps d'intérêt.  Aujourd'hui, l’équipe  souhaite évaluer le potentiel thérapeutique des anticorps sécrétés par la lignée 83D4.

Les objectifs du projet

Pour répondre au besoin du client, les 3 objectifs à atteindre sont :

• Vérifier la viabilité et la capacité de sécrétion des cellules, et la spécificité des anticorps
• Sécuriser la lignée cellulaire pour assurer sa pérennité
• Evaluer le potentiel thérapeutique en identifiant les tissus normaux et tumoraux ciblés par l'anticorps.
  

La Mise-en-Œuvre

Objectif 1 : Vérifier la viabilité, la capacité de sécrétion des cellules et la spécificité des anticorps

> Evaluation du clone

Les cellules ont été mises en culture et un pilote de production (in vitro) a été réalisé. Les anticorps produits et purifiés ont ainsi pu être contrôlés et caractérisés (isotype, activité, point isoélectrique, .). De plus, le client a reçu un échantillon d'anticorps lui permettant de réaliser des contrôles complémentaires.

Objectif 2 : Sécuriser la lignée cellulaire pour assurer sa pérennité

> Constitution d'une banque et Safe Cell Banking

P.A.R.I.S a produit une banque cellulaire, certifiée exempte de mycoplasme par un laboratoire indépendant.

La banque cellulaire est sécurisée sur les 2 sites de stockages de P.A.R.I.S, géographiquement distincts. La gestion sécurisée des banques garantie une parfaite traçabilité des mouvements des cellules et une information régulière du client par l'envoi de rapports trimestriels.

Objectif 3 : Identifier les tissus normaux et tumoraux ciblés par l'anticorps

>  Réalisation de tests de réactivité croisée (Tissue cross-reactivity studies)

Les études de réactivité croisée sur tissus sont une étape essentielle dans l'évaluation du potentiel thérapeutique d'un anticorps monoclonal. Elles permettent d'identifier les tissus normaux qui pourraient être ciblés par l'anticorps (et donc les éventuels risques de réaction du patient en cas d'injection), identifier les cibles thérapeutiques potentielles, et vérifier la pertinence du modèle animal choisi. Ces essais sont réalisés en collaboration avec le Dr Benjaballah du CHU de Beauvais.

Dans le cas du 83D4, ont été réalisés:

• des essais par tissue Microarray (TMA) sur tissus humains normaux et tumoraux
• des essais par coupe scanographique sur tissus de souris normaux et tumoraux.

   

En Conclusion

A l'issue de ce projet, le client dispose d’une banque de cellules viables et sécrétrices d'anticorps spécifiques, gérées et conservées via un système sécurisé. Les données du pilote de production permettent à P.A.R.I.S de produire rapidement les anticorps, à la demande du Client, avec une qualité et un prix connus.

Les cibles thérapeutiques potentielles sur lesquelles l’anticorps pourrait avoir une action ont été indentifiées, ainsi que les types de tissus humains normaux auxquels se lient son anticorps, et donc les risques potentiels de réactions associés.

Enfin, les essais ont permis de valider la pertinence de la souris comme modèle animal pour des essais de bio-activité in vivo.

L’avis du Client

L'ensemble de ces tests était un préalable indispensable à l'étape de validation de la preuve de concept. En effet, avant d'évaluer l'activité thérapeutique potentielle de notre anticorps, il était important : d'une part, de vérifier que notre clone était toujours "actif", et d'autre part, de tester son activité immunologique sur différents types de tissus, différents types de cancer et différents types de tumeurs.

Les tests réalisés par P.A.R.I.S et par le Dr Benjaballah (CHU de Beauvais) nous ont permis de valider la viabilité, la productivité, et l'activité immunologique de notre hybridome.

Notre objectif est désormais d'établir la preuve de concept. Pour cela, nous allons mener des études pré-cliniques sur des souris immunodéprimées (souris SCID) sur lesquelles auront été greffées des tumeurs humaines, et évaluer l'activité thérapeutique de notre anticorps.

Grâce au pilote de production réalisé par P.A.R.I.S, nous savons également que notre anticorps sera produit en quantité et avec une qualité suffisante pour réaliser ces études expérimentales.